En épocas anteriores, en su término municipal existieron distintos asentamientos, como Orippo, ciudad romana en la "Vía Augusta" de Roma a Cádiz probablemente ya poblada anteriormente por Turdetanos. De esta ciudad quedan la Torre de los Herberos y distintos restos que en la actualidad están siendo excavados. Estos restos incluyen varios hornos de alfar, algunos perfectamente conservados.
Aparece en los "Vasos de Vicarello" y es citada en el "Itinerario de Antonino" como la Quinta Mansión de ls VII vía militar que iba de Gades a Corduba, a 24 millas de Ugia (Las Cabezas de San Juan) y 9 millas de Hispalis.
Torre de los Herberos
En la época árabe no se tiene constancia de ningún núcleo de población, los terrenos que actualmente forman Dos Hermanas formaban parte de la Kora de Sevilla, y contaban con varias alquerías que formaban unidades de producción, que han llegado casi hasta nuestros días en forma de los cortijos que poblaban, y aún algunos pueblan, la zona.
Parroquia de Santa María Magdalena
El origen del actual asentamiento es el reparto de tierras que se hizo tras la conquista de Sevilla por el rey castellano Fernando III, (23 de noviembre de 1248), su hijo Alfonso X, repartió las tierras conquistadas entre los soldados que habían participado en ella.
El actual término municipal fue repartido entre varios, pero el que a la larga dio origen a la actual ciudad, fue el trozo que le correspondió a un adalid, (jefe de partida), de León llamado Gonzalo Nazareno, al que según el libro Repartimento de Sevilla le correspondió:
"tres yugadas de heredad allende de Guadayra e aquende del Guadalquivir, es contra Xeres e es contra Lebrixa"
Este reparto conllevaba la repoblación del lugar, por lo que desde su lugar de origen, probablemente el actual Villavicencio de los Caballeros (Valladolid), llegaron, entre otros, dos hermanas, Elvira y Estefanía Nazareno, probablemente hermanas a su vez de Gonzalo Nazareno.
Cuenta la leyenda que guiadas por el sonido de una campana, encontraron un imagen gótica "triplex" representando a Sta. Ana, María y Jesús, alrededor de la gruta construyeron una iglesia, que junto a los cortijos adyacentes constituirían el germen de la actual ciudad.
No se conoce el destino final de la familia Nazareno, pudiendo, como era corriente en la época haber vendido sus posesiones y volver a Castilla.
El documento más antiguo en el que aparece el nombre de "Dos Hermanas" data de 1404 y se halla en el inventario de los papeles del Mayordomazgo de Sevilla, donde se recogen un mandamiento para que pagasen los "maravedíes" que les correspondían para pagar las defensas contra el Reino de Granada.
De la Dos Hermanas del siglo XVI no se tienen prácticamente datos, si exceptuamos los distintos censos de población que se hacían en la época, los cuales eran corrientemente falseados para evadir impuestos, se deduce que su economía era eminentemente agropecuaria con la excepción de la producción de cal.
Durante este siglo y gran parte del posterior, era villa de realengo, es decir, dependía directamante de la Corona. Pero a mediados del siglo XVI hubo algunos intento de compra, incluso el Conde-Duque de Olivares lo intentó entre 1621 y 1643.
De 1631 a 1636 perteneció a la Casa de Arcos y a partir de esta fecha pasa el Señorío y jurisdicción a la familia Pedrosa, que el 30 de Diciembre de 1679 obtiene el Marquesado de Dos Hermanas. Tenía la población aproximadamente 200 familias (unos 1.000 habitantes), en su mayor parte ocupadas en el cultivo de las fincas que poseían en el término las más ilustres familias sevillanas, según Rodrigo Caro. Hacia la misma fecha últimamente citada se crea el Marquesado de la Serrezuela, que luego se convertiría en Villa independiente de Dos Hermanas hasta principios del siglo XIX.
En 1911 por Real Decreto se concede al Ayuntamiento el tratamiento de "Excelencia" ya que Dos Hermanas empezaba a ser importante en el comercio y la industria, en razón de haberse iniciado la actividad de sus almacenes de aceitunas, pioneros en la exportación a los Estados Unidos.
Por Decreto 513/1974 del 14 de Febrero, se aprobó el escudo heráldico de Dos Hermanas, reconociéndosele el título de Ciudad por Decreto de 24 de Julio de 1975.
